數字PCR是一種精準的核酸絕對定量技術，可對目標基因進行絕對定量，具有卓越的靈敏度和精準度。其靈敏度高的關鍵因素在于將PCR混合液分割成數萬個油包水的獨立微滴。液相和油相之間的界面上發生的化學相互作用可能會影響PCR擴增效率。PCR預混液的組成和性能對于確保靶點的有效擴增和微滴穩定性至關重要。naica® multiplex PCR MIX是數字PCR頭部企業法國Stilla Technologies公司生產，專用于在naica® 微滴芯片數字PCR系統，在整個檢測動態范圍內，提供強大的微滴穩定性和卓越線性范圍的多重目標基因的定量檢測。
 

為了達到最佳靈活性和靈敏度，我們提供5X和10X濃度的naica® multiplex PCR MIX以降低MIX用量，從而使得更多的反應體積可供更多的模板、引物或探針的加入。
 

naica® multiplex PCR MIX可在naica®微滴芯片數字PCR系統的動態范圍內對多個靶點進行同時定量，并保持良好線性。

采用0.2到13000cp/uL的DNA樣本，使用10X naica® multiplex PCR MIX，在naica®微滴芯片數字PCR系統上進行三個靶點的同時檢測（圖1）。高濃度的PCR MIX（5倍和10倍濃度均可使用）可使樣本輸入體積最大化，從而提高低濃度樣本中目標靶點的檢測能力。

▲ 圖1：使用naica® multiplex PCR MIX同時對3個靶點（BRAF、ALB和pUC18）進行線性定量。將人類基因組(hg)DNA和pUC18質粒進行連續稀釋（0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000cp/uL），各稀釋液進行3次重復檢測。結果顯示各靶點的線性關系好，R2均大于0.99，說明結果高度真實可靠。

在多重檢測中可以對低濃度靶點進行穩定且靈敏的檢測。

多重檢測中多個靶點的共擴增比單個靶點的擴增更為復雜，可能會因為潛在的干擾和反應復雜性的影響，導致多重檢測的線性范圍降低。在naica®微滴芯片數字PCR系統上使用naica® multiplex PCR MIX分別進行3重和單重檢測（圖2），結果發現，不管是在高濃度的外部靶點（BRAF和ALB hgDNA）存在的情況下（圖2A）還是在外部靶點不存在的情況下（圖2B），兩組實驗中pUC18線性量化的動態范圍一致，且陽性微滴和陰性微滴群組的熒光水平和可分性也高度一致。此外，不管是單重還是3重檢測，pUC18靶點都能得到可靠的定量（圖3），且檢測范圍和線性度一致。

▲ 圖2：使用naica® multiplex PCR MIX進行的3重和單重擴增的比較。將pUC18質粒的13000至0.2 cp/uL的系列稀釋液在2個外部擴增靶點背景下(每個靶標為3000cp/uL,圖A))和在不含外部靶點(圖B)的情況下進行定量檢測,3次重復。結果顯示，3重和單重擴增中pUC18的檢測結果高度一致。注：3重和單重的反應液中均含有pUC18、BRAF和ALB的特異性引物探針。

▲圖3：使用naica® multiplex PCR MIX的擴增結果真實可靠。采用13000-0.2cp / uL的pUC18 DNA稀釋液進行3重(A)和單重檢測(B)，各稀釋液進行3次重復。(A) 3重反應中額外加入3000cp / uL(10ng)的hgDNA模板；(B) 單重反應中沒有額外加入hgDNA模板。結果顯示，3重和單重反應中，pUC18均能獲得真實可靠的定量結果，同時檢測范圍和線性高度一致；3重反應中BRAF和ALB檢測也具有良好的重復性，相對標準偏差在2.3-2.5%之間，n=21。

訂購信息：

Eva Green®染料法的naica® PCR Mix也可訂購。