用順序浮選法快速分離血清脂蛋白
用順序浮選法快速分離血清脂蛋白
用超速離心機分離血清脂蛋白，常用順序浮選法（Sequence floating）和單次垂直管分離法(SVS),各種轉速和容量都可以做，下面介紹一種簡單、快捷的微量固定角式轉頭分離法，結果可供研究與臨床分析。
一）設備：
● 日立CS150GXL 制備型微量超速離心機
● 轉頭：S140AT 固定角式轉頭，Nmax＝140,000rpm，RCFmax＝1,050,000(xg)，最大容量10×2ml
● 離心管：1ml 聚碳酸脂（PC）全透明厚壁管
二）溶液配置：
A液：（密度＝1.006克/毫升）。11.4克NaCl，0.1克EDTA-2Na置于1,000ml量筒，加500ml重蒸水及1ml 1N NaoH，充分混合直至全部溶解，加重蒸水至1,000ml，再加3ml重蒸水（NaCl含量為0.195mol）
B液：（密度=1.182克/毫升），取100ml A液，加入NaBr 24.98克（Nacl：0.195mol.，NaBr：2.44mol.）
C液：（密度＝1.478克/毫升），取100ml A液，加NaBr 78.32克（NaCl＝0.195mol. NaBr:7.65mol.）
三）其他：
樣品：禁食后抽取的靜脈血，低速離心去血球（不禁食抽取的血液中含乳麋粒-Chylomicrom第一次離心后會浮在VLDL之上）。
顯色劑：脂肪紅7B（FAT RED 7B），便于肉眼觀察。
四）離心分離：
I．VLDL（密度＜1.006克/毫升）分離
1 PC厚壁管，下部為血清600μl，上部為300μl A液
離心：140,000rpm，16℃，50分鐘，加速“5”，減速“7”
結果：VLDL 浮在液面，有顯見的一薄層
II．LDL（1.006克/毫升＜密度＜1.063克/毫升）分離
第（I）次離心后的PC管，抽去上部含VLDL的溶液300μl。抽去VLDL后，在剩余的液體（約600μl）上加入300μl溶液B，并充分混勻。
離心：140,000rpm，16℃，80分鐘，加速“9”，減速“7”
結果：液面上浮著一層LDL（含有IDL）下部為HDL與血清蛋白混合液。
III．HDL（1.063克/毫升＜密度＜1.21克/毫升）分離
第（II）次離心后的PC管抽去上部含LDL的溶液300μl，抽去LDL后在剩余的液體（約600μl）中加入300μl 溶液C，充份混勻。
離心：140,000rpm，16℃，140分鐘，加速“9”，減速“7”
結果：液面上浮面一層HDL，下部是血清白蛋白和球蛋白。
標簽：
順序浮選法
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