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Flag標簽抗體在免疫沉淀IP&免疫熒光IF中的應用

瀏覽次數:4114 發布日期:2010-11-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統,廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。Flag標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸(DYKDDDDK)組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成,因此它不會占據其他表位與結合域,避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發生改變。由于它的親水性特點,Flag標簽傾向于定位在融合蛋白表面,因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。Flag抗體推薦—可進行WB/IF/IP檢測應用

如何選擇合適的Flag標簽抗體?

我們在選擇Flag抗體時,主要根據自己的需要,特別是實驗應用上的需要。另外,一個抗體檢測后的應用類型越多,在使用過程中的選擇余地就越大;而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩定性以及效價都要優于多克隆抗體。 另外,抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面,也即相當于實際應用時的稀釋比率。一個效價高的100μl Flag抗體(假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000,最終使用液相當于500ml),要比效價低的1ml的Flag抗體(假如WB檢測的稀釋比率是 1:200,最終使用液相當于2ml)性價比更高。

 

Abbkine的Flag標簽抗體的效價有點超出意料。做WB實驗時,第一次按照說明書推薦的1:1000,顯示的條帶很強,后來不斷的稀釋摸索條件,1:10000稀釋的時候做WB條帶仍然是很不錯的。 ——中山大學醫學部一客戶

產品名稱及描述 品牌 貨號 產品說明
Anti-Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02010 詳情
Anti-Flag Tag Rabbit Polyclonal Antibody Abbkine A02011 詳情
HRP Conjugated Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02015 詳情

 

為什么推薦Abbkine品牌的Flag抗體?

Flag系統是Sigma-Aldrich®擁有的系統,因此Sigma的Flag標簽抗體是之前諸多客戶的選擇。Sigma的Flag標簽抗體主要有M1和M2兩種克隆號的抗體,其中M1克隆號的Flag抗體可用于檢測Flag標簽位于N末端的重組蛋白,而M2克隆號的Flag單克隆抗體則可以檢測幾乎所有的Flag標簽蛋白。其2010年的中國報價分別為¥4649/200μg和¥3683/200μg。

假如您想選擇一款性價比更高的Flag標簽抗體,那Abbkine可能是另一個優先選擇,其價格比Sigma要低30%左右。Abbkine的Flag標簽抗體 Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#A02010)可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白(包括N末端、C末端)等。該Flag抗體為小鼠源單克隆抗體,其免疫原為KLH偶聯的Flag標簽(DYKDDDDK)多肽。另外,Abbkine還同時提供經HRP偶聯的Flag標簽抗體,尤其適合IP-WB驗證時去除二抗的干擾;兔源多克隆Flag抗體也為客戶提供另一種Flag標簽的檢測方案。

產品名稱及描述 品牌 貨號 產品說明
Anti-Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02010 詳情
Anti-Flag Tag Rabbit Polyclonal Antibody Abbkine A02011 詳情
HRP Conjugated Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02015 詳情

 

Abbkine的Flag單克隆標簽抗體不僅能應用于細胞內定位的IF實驗,同樣還能應用于IP實驗。1:200甚至更高的IP實驗稀釋比率,也說明了該抗體本身的具有很高的效價,同時,因為是單克隆抗體,因此特異性也很高。高效價所對應的高稀釋比率也意味著高性價比。對于WB實驗,其說明書的推薦起始稀釋比例是1:1000,但在在1:5,000的稀釋比率下也表現優異(Abbkine也進行了10,000次以后的稀釋,仍然顯示出很好的條帶顯示,沒有在說明書里列出)。下圖為Abbkine的Flag抗體的應用圖示。

點擊圖片查看Flag標簽抗體更詳細信息

 

一個高效價的抗體不僅影響實驗結果的靈敏度,還意味著更高的性價比。Abbkine的Flag標簽抗體(貨號#A02010)在常規的WB實驗里, 推薦的起始稀釋比率為1:1000,實際在Abbkine的應用中,還有1:10,000甚至更高的稀釋比率,需要根據客戶具體的實驗條件進行進行優化。

Abbkine還提供大包裝1ml的Flag標簽抗體,非常適合經常進行His標簽系統免疫學檢測的實驗需求。為方便客戶的使用, 上述產品,Abbkine均在中國備有現貨。Abbkine針對中國市場,提供全球化的產品質量追蹤和售后服務以及保障,如果您在使用過程中有任何問題, 請直接與其當地代理商艾美捷科技有限公司聯系。

產品名稱及描述 品牌 貨號 產品說明
Anti-Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02010 詳情
Anti-Flag Tag Rabbit Polyclonal Antibody Abbkine A02011 詳情
HRP Conjugated Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody (1B10) Abbkine A02015 詳情

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