ABI 3730XL測序平臺的原理及特點
Applied Biosystems 3730XL測序儀是高質量的長片段讀取和序列分析的測序平臺，應用靈活而廣泛。3730XL可同時分析96個樣品，該儀器采用4色熒光同時檢測，可不間斷24小時運行，自動灌膠，上樣，電泳分離，檢測及數據分析。本儀器除了能夠完成新基因測序工作或比較測序工作外，還可進行多種片段分析，包括微衛星 DNA 分析，比較基因型分析，單核苷酸多態性 (SNP) 研究等。
ABI 3730XL測序儀
測序峰圖
雙脫氧鏈終止法原理
雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法，其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進行復制時，在四管反應體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團，當ddNTP摻入鏈的末端時，該鏈就會停止延伸。如此每管反應體系中就產生了一系列長度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。反應終止后，分4個泳道進行凝膠電泳以分離長短不一的DNA片段，相鄰的片段長度相差一個堿基。經放射自顯影后，根據片段3’端的雙脫氧核苷，便可獲得合成片段的堿基排列順序。
Sanger法測序原理圖
ABI 3730XL測序儀技術原理
ABI 3730XL自動測序儀是基于毛細管電泳和熒光標記技術的DNA測序儀。基于Sanger法，3730XL測序儀擁有96道毛細管，并用熒光標記代替了同位素標記，從而大大提高了DNA測序的速度和準確性。4種雙脫氧核苷酸(ddNTP)的堿基分別用不同的熒光進行標記，在通過毛細管時不同長度的DNA片段上的4種熒光基團被激光激發，發出不同顏色的熒光，被CCD檢測系統識別，并直接翻譯成DNA序列。
儀器特點
1. 雙光束雙側激光激發，光柵分光裝置和后置超薄CCD檢測成像系統。
2. 自動灌膠、上樣、電泳分離、檢測及數據分析，可連續運行24小時無需人工干預。
3. 一次電泳測定96個樣品，一天可跑12次測序電泳，每天的測序產率是1152個樣品。
4. 自動堿基識別、基因型分析與質量評分判定。
5. 最新POP-7液體分離膠，動態內鍍毛細管壁，使讀序長度達1000bp以上，精確讀序達800bp。
6. 良好的溫控裝置提供了更大的溫控范圍(18~70℃)，電泳溫度可達70℃，有助于去除二級結構的影響。
7. 高靈敏度減少DNA和測序試劑的使用量。
8. 更高的自動化減少勞力成本及人為失誤的成本。
技術應用
1. 菌液、質粒、PCR產物測序
2. Fosmid/Cosmid/BAC雙末端測序
3. 大片段鳥槍法測序
4. EST測序和分析
5. 步移測序
6. SNP發現和重測序
7. STR分型
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