韩国免费A级作爱片无码_亚洲欧洲精品成人久久av18_亚洲国产成人AV毛片大全_成年人在线免费看的惊悚动作片_一级爽片_爱爱免费

English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 細胞技術(shù)專題:大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)實驗

細胞技術(shù)專題:大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)實驗

瀏覽次數(shù):1171 發(fā)布日期:2014-2-25  來源:上海北諾生物科技有限公司

大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)可以:(1)獲得大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞;(2)用于神經(jīng)元細胞定向分化研究;(3)用于神經(jīng)元細胞凋亡研究。

實驗方法
  • 機械性劃割培養(yǎng)
  • 酶消化法
實驗方法原理 SD胎鼠腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)7 d,微量移液器塑料滴頭于培養(yǎng)孔內(nèi)機械性劃割培養(yǎng)之神經(jīng)元,依劃割程度不同分為輕、中、重3組,對照組除不進行機械性劃割,其余處理同損傷組,傷后不同時間點(10,30min , 1,3,6,12,24 h)檢測細胞存活率及培養(yǎng)液上清乳酸脫氫酶(LDH)含量。
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟
一、實驗步驟
 
1. 孕16 d SD 大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚,依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜,無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的 D-Hanks’平衡鹽液中。
 
2. 在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層,除去腦膜,剪碎組織成約1mm3 大小,加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱內(nèi)消化20 min,中間搖晃一次。
 
3. 隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液(DMEM+10%FBS)的離心管內(nèi)終止消化液作用5 min。
 
4. 用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的 DMEM+10%FBS 的離心管內(nèi),用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次,靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟 2~3 次。
 
5. 將所收集的上清經(jīng)200 目篩網(wǎng)過濾。
 
6. 過濾后的細胞懸液于800 rpm 離心5 min,棄上清,管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液(DMEM+20%FBS)并吹打 成單細胞懸液。
 
7. 細胞計數(shù),調(diào)整細胞密度按1.5×105/cm2  種入6 孔板內(nèi),放入CO孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h 后換液并 加入Ara-C使其終濃度為 1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量換液。以后每隔 3 天半量換液一次。
收起 
注意事項
1. 上面的步驟是傳統(tǒng)方法。有許多地方可以進行改動:如消化時可以直接用0.125-0.25%的胰酶消 化15-20 min 左右,也可用 DNA 酶進行消化,有人還直接進行吹打,都可行。
 
2. 上面雖然時大鼠皮層神經(jīng)元,但是同樣適用于小鼠,但是應(yīng)該選擇孕13 d 左右的小鼠。
 
3. 神經(jīng)元是一種比較難培養(yǎng)的細胞,因此在接種時細胞的密度一定要夠。
 
4. 在玻片上培養(yǎng)神經(jīng)元時,一定要注意玻片的來源和處理方法,這個非常重要,對神經(jīng)細胞的影響 是很大的。如果您現(xiàn)在在玻片上培養(yǎng)的神經(jīng)元生長情況還不錯的話,那么您在以后的培養(yǎng)中最好還是用同 一來源(廠家)的玻片。
 
5. 如果有B27 和neurobasal 培養(yǎng)基,那么就方便了(不用加 AraC):
 
(1)把細胞懸液用(DMEM+20%FBS)懸浮,種到培養(yǎng)皿上6-12 h 后,全量換成 2% B27 的 neurobasal 培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),3 d 半量換液。
 
(2)把細胞懸液用直接用 2% B27 的 neurobasal 培養(yǎng)基懸浮接種。
 
(3)可以用新生1 d 內(nèi)的胎鼠皮層直接培養(yǎng)。
 
發(fā)布者:上海北諾生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-57730393,15800960770
E-mail:beinuobio@163.com

標(biāo)簽: 大鼠 神經(jīng)元細胞
用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網(wǎng)友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 人妻熟妇乱又伦精品视频 | 国产成人精品综合久久久 | 亚洲AⅤ片不卡无码久久 | 欧美又大又粗又硬又色A片 ww污污污网站在线看com | 一级影片在线观看 | AAA日本高清在线播放免费观看 | 国色天香中文字幕在线视频 | 国产白袜脚足J棉袜在线观看 | 国产人妻人伦又粗又大爽歪歪 | 国产无遮挡色视频免费观看性色 | 好男人社区WWW在线官网 | 狠狠色狠狠色综合日日小说 | 91亚州熟女网站 | 欧美人妻日韩精品 | 一本色道婷婷久久欧美 | 欧美熟妇XXXXX欧美老妇不卡 | 在线观看的黄色网址 | 欧美二区精品 | 亚洲成色在线综合网站 | 成人亚洲中文字幕无线乱码 | 成年人视频在线免费 | 麻豆一区二区99久久久久 | 亚洲AV久久久噜噜噜赌场 | 久久亚洲二区三区 | 内射视频←WWW夜 | BAOYU最新无码网站在线观看 | 少妇又色又紧又爽又刺激视频 | 中文字幕亚洲欧美日韩2019 | 免费做A爰片久久毛片A片 | 日韩999| 国产精品永久久久久久久www | 暗呦交小u女国产精品视频 国产V在线最新观看视频 | 一区二区三区午夜无码视频 | 成人免费久久 | 日韩人妻无码精品一专区二区三区 | 久久综合爱 | 国产精产国品一二三产区视频 | 精品国产日韩亚洲一区 | 国产福利日本一区二区三区 | 护士奶头又白又大又好模 | 99人精品福利在线观看 |