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FITC標記反應原理

瀏覽次數(shù):822 發(fā)布日期:2018-7-16 

FITC標記反應原理:
        蛋白質(zhì)分子的賴氨酸殘基的游離氨基可與FITC發(fā)生親核反應,形成硫脲連接而共價結(jié)合。
 操作過程:
實驗前準備:

  1.   仔細閱讀使用說明書。
  2.   計算待使用FITC的量。
  3.   提前20 min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的FITC繼續(xù)放置冰箱中)。
  4.   溶解FITC:加入30 μL DMF至FITC瓶中,靜置10 min,待其充分溶解,此時FITC的濃度為10 mg/mL。


操作步驟:(本操作步驟按照1 mg的量進行標記)

  1.   取1 mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL,12,000× g離心10 min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5 mL。 ②待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次。)
  2.   加入15 μL FITC 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使抗體的終濃度為2 mg/mL,并輕輕吹打混勻。放入37 ℃恒溫箱中避光溫育60 min。
  3.   12,000× g離心10 min。
  4.   加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5 mL,并輕輕吹打混勻,12,000× g離心10 min。并重復操作一次。
  5.   加0.2 mL Labeling Buffer至Filtration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉(zhuǎn)放置于另一個離心管中,6,000× g離心10 min。
  6.   收集離心管中的溶液,即為FITC標記的抗體。


注意事項:

  1.   本試劑盒也可標記其它含有氨基(NH2-)的抗原、HRP、多肽,具體標記比例根據(jù)待標記物中氨基的數(shù)量確定。
  2.   DMF要密封干燥保存,使用完立即用封口膜封緊。
  3.   操作步驟5中,可用Labeling Buffer作為回收標記抗體的緩沖液,也可使用其它任何緩沖液或保護劑。
  4.   本試劑盒未開封前的有效期為一年,請在有效期內(nèi)使用。
  5.   本試劑盒提供的為10 kDa的Filtration tube,標記抗原或多肽請注意分子量的大小。
  6.   在步驟2中,標記其它抗體時,我們應先控制抗體的終濃度為2 mg/mL,然后再根據(jù)抗體的量計算應加入FITC的體積。
  7.   要確定在偶聯(lián)中不引入游離氨基(Tris,氨及疊氮鈉均可與FITC反應,因此會降低蛋白與FITC的偶聯(lián)率)
發(fā)布者:武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
聯(lián)系電話:400-999-2100
E-mail:marketing@elabscience.cn

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