數(shù)字PCR在癌癥早篩和微小殘留病灶檢測(cè)的應(yīng)用

瀏覽次數(shù)：2868　發(fā)布日期：2019-12-11　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

最近幾十年的大量研究表明，在許多血液系統(tǒng)惡性腫瘤中，微小殘留病灶（MRD）與臨床結(jié)果及預(yù)后顯著相關(guān)。癌癥中MRD是指癌癥治療達(dá)到完全緩解后，用常規(guī)的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法不能檢測(cè)到明顯的癌病灶，而此時(shí)體內(nèi)仍存在的少量癌細(xì)胞。微小殘留病灶是腫瘤復(fù)發(fā)的直接原因。

目前應(yīng)用最廣泛最精確的MRD檢測(cè)手段是通過(guò)取患者的血液，對(duì)其中的循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）進(jìn)行檢測(cè)，這種方法也叫做液體活檢（liquid biopsy），它可以獲取患者腫瘤病變信息，用以幫助診斷治療。

臨床研究主要是基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的方法對(duì)淋巴疾病的MRD進(jìn)行評(píng)估。第一篇描述PCR在淋巴瘤MRD檢測(cè)中的臨床研究由Gribben JG在1991年發(fā)表。隨后又引入了基于TaqMan的實(shí)時(shí)PCR（qPCR），它可以定量分子靶標(biāo)。目前，qPCR是用于MRD檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化方法，但該方法有一定的局限性，由于MRD本身的特征，常規(guī)的qPCR在檢測(cè)時(shí)往往達(dá)不到理想的效果。

為了克服標(biāo)準(zhǔn)分子技術(shù)的一些缺陷，需要高精度、高通量的MRD檢測(cè)工具，數(shù)字PCR技術(shù)作為第三代PCR技術(shù)，在靈敏度以及精準(zhǔn)度上遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于qPCR。如一篇文章中報(bào)道，研究人員利用數(shù)字PCR以及二代測(cè)序技術(shù)對(duì)淋巴增生性疾病MRD進(jìn)行監(jiān)測(cè)，探究其在液體活檢方面的可行性。

在本篇文章中，研究人員發(fā)現(xiàn)與qPCR相比，數(shù)字PCR在進(jìn)行MRD研究中具有許多實(shí)用優(yōu)勢(shì)。數(shù)字PCR無(wú)需依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣品定量，可以避免因反應(yīng)效率波動(dòng)而導(dǎo)致的結(jié)果差異，使那些由于診斷時(shí)腫瘤負(fù)荷低而無(wú)法生成可靠的標(biāo)準(zhǔn)曲線的患者得以康復(fù)。而且，它可以幫助節(jié)省寶貴診斷時(shí)間。
此外，文章報(bào)道了數(shù)字PCR技術(shù)在其他惡性血液病的MRD評(píng)價(jià)方面取得了較大進(jìn)展。例如，在慢性髓系白血病中，與標(biāo)準(zhǔn)qPCR相比，數(shù)字PCR在低轉(zhuǎn)錄水平樣本的檢測(cè)上更加準(zhǔn)確。
本研究表明，數(shù)字PCR可能會(huì)改變當(dāng)前的MRD監(jiān)測(cè)方法，從而使將來(lái)的試驗(yàn)可以更好地表征血液系統(tǒng)疾病，幫助研究人員開發(fā)出MRD檢測(cè)的個(gè)性化方法。

法國(guó)Stilla Technologies的Naica微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)，利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過(guò)程的唯一耗材。樣品通過(guò)毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個(gè)微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。并且還是首款3色熒光檢測(cè)儀器，整個(gè)流程只需要兩個(gè)半小時(shí)。結(jié)合強(qiáng)大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測(cè)功能，從而達(dá)到了數(shù)字PCR定量卓越的置信水平，獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可信。