基于病毒的生物制品生產中的切向流過濾應用

來自加拿大麥吉爾大學等的科學家們在2019年第37的《Vaccine》雜志上發表了題為“Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK293SF cells”的文章。文中，研究人員指出埃博拉病毒疾病目前仍是一種為國際社會關切的重點疾病，已有多篇文章報導了數種疫苗首選物在非人體靈長類動物研究以及臨床試驗中的積極結果，而其中最有前景的是rVSV-ZEBOV疫苗（基于重組水泡口炎病毒的埃博拉病毒Zaire株疫苗）。在此研究中，研究人員嘗試使用懸浮的HEK 293SF細胞和無血清培養基生產rVSV-ZEBOV，其目的是使用HEK 293SF生產平臺，建議工藝，優化生產滴度，證實生產的可放大性以及所獲得物料在動物模型中誘導免疫反應的有效性。

文中，生產和純化用于動物研究的rVSV-ZEBOV物料時，以2L搖瓶培養HEK 293SF細胞，工作體積600mL，培養至細胞密度1.88 x 10^6cells/mL，以MOI 0.01感染，感染后48小時收獲培養液，加入10 U/mL Benzonase孵育，消解DNA和RNA。離心收獲含有rVSV-ZEBOV的上清液，使用63mm玻璃纖維預過濾器和0.45μm過濾器兩步過濾。濾液使用配有MWCO 750 kD 中空纖維組件的KrosFlo® Research 2i 切向流過濾系統濃縮40倍，濃縮的病毒再以碘克沙醇密度梯度離心純化，并以由10mM Tris組成并補充4%蔗糖的注射緩沖液洗濾7體積。樣品進一步濃縮至3.5mL，然后加入人血清白蛋白至終濃度2.5 g/L，以確保凍存時，注射緩沖液中的純化病毒的穩定性。

原文：J.Gelinas, H.Azizi, S.Kiesslich, et al., Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK 293SF cells. Vaccine, 2019, 37: 6624-6632.

掃描，關注瑞普利金微信公眾號，獲取更多應用資訊

點擊，觀看視頻：KrosFlo KR2i 系統簡介

點擊，觀看視頻：“無需看管”的自動化切向流過濾系統

聯系我們

瑞普利金（上海）生物科技有限公司
中國（上海）自由貿易試驗區張江路1238弄1號樓2層G座

電話：021 - 6881 0228 | 網站：www.repligen.com