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多肽純度和多肽含量的區別及DMSO在多肽溶解中的使用建議

瀏覽次數:3278 發布日期:2021-1-29  來源:肽谷生物官網
1. 多肽純度和多肽含量的區別     
在我們使用多肽的過程中,我們經常會遇到多肽純度和多肽含量這兩個指標,而很多小伙伴可能會有這樣的疑問,為什么我們的多肽純度是95%,但是肽含量卻只有80%呢?因為,這個是兩個完全不同的概念。

多肽純度:多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長)處檢測到的目標多肽的含量;

多肽含量:是指樣品中肽類物質相對于非肽類物質所占的百分比;
多肽的純度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽鏈的吸收波長)處檢測到的目標多肽的含量;除了目標多肽外,HPLC還可以檢測到的雜質包括:缺失序列(缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列),截斷序列(加保護過程中產生的序列)以及脫保護不完全序列(產生于整個合成過程或最后的裂解過程)等;但是,HPLC檢測不到水和殘留的鹽份如三氟乙酸鹽,醋酸鹽等,而在多肽合成過程中,多肽是通過三氟乙酸將肽序從樹脂上切割下來的,而且在純化過程中也會產生少量的TFA,因此,多肽游離的氨基末端和其他側鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質;還有一個就是水分,多肽通常采用凍干法脫水,即使如此,水也會因共價結合的能力不同而不同程度地存在著,因此,通常交付的多肽中,通常都含有TFA鹽和微量的水分,而這些都是HPLC檢測不出來的,因此,導致了肽含量和肽純度的不同。

我們知道,多肽純度是用HPLC分析法檢測得到的,那么肽含量又是如何檢測的呢?通常,肽含量通過氨基酸組分分析或紫外分光法測定的。這個信息主要是在一些對肽的濃度很敏感的實驗中,對計算肽的濃度是很重要的。

2. DMSO在多肽溶解中的使用及細胞毒性耐受建議
在我們溶解多肽的時候,經常會遇到一些疏水性序列,這就導致了多肽很難以我們想要的濃度溶解于水中,這個時候,我們可以考慮使用DMSO。

DMSO(二甲基亞砜)是一種含硫有機化合物,分子式為(CH3)2SO,常溫下為無色無臭的透明液體。DMSO作為冷凍保護劑經常應用于細胞庫。在細胞冷凍過程中,DMSO可防止胞內/胞外晶體的形成,其工作濃度為10%。DMSO通常可與鹽或血清白蛋白結合。

疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加細胞的通透性,若多肽溶解于DMSO中則會對細胞產生毒性作用。高濃度的DMSO絕不可應用于細胞培養中。這個時候,我們可以考慮控制溶液中DMSO的溶度。通常,濃度為5%的DMSO即可讓細胞膜溶解。大多數細胞株可以容忍0.5% DMSO,少許可以容忍1%的濃度,而不表現出嚴重的細胞毒性。然而原代細胞培養對其更敏感。所以如果是用原代細胞做劑量/反應曲線(可行性),其濃度應低于0.1%。

下面是我們對于細胞對DMSO毒性耐受性的一些經驗:
          • 對幾乎所有的細胞來說,濃度為0.1%DMSO是安全的。
          • 廣泛被用于細胞培養的DMSO終濃度為0.5%,不會引起細胞毒性。
          • 雖然對部份細胞來說,1%DMSO也不會產生細胞毒性,但我們推薦0.5%。
          • 也有5%DMSO成功地應用于某些細胞的案例。
          • 始終保持終濃度在0.5%,但儲存時可200倍高濃度溶于100%的DMSO中。


對于某些疏水性非常高的多肽,可先嘗試將其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中,然后慢慢 (一滴一滴地)將其添加到不斷攪拌的水溶液如PBS或其他想要的緩沖液中,直至理想濃度。如果滴加過程中,肽溶液開始變渾濁,說明已經達到了溶解極限。另外,還可以嘗試使用超聲波幫助多肽溶解。
發布者:南京肽谷生物科技有限公司
聯系電話:18115476705
E-mail:sales@tgpeptide.com

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