MP-SPR應用 - 植入材料表面癌細胞實時檢測與細胞粘附
植入物被植入人體后，會被蛋白質和細胞覆蓋。為了了解這些界面上的相互作用，需要使用體外工具。允許動態和靜態流動條件的實時無標簽平臺被用來了解細胞粘附，并以這種方式提高植入物的兼容性。同樣的特點也有利于基于細胞檢測的生物傳感器的發展。細胞也可以用作臨床生物傳感器(用于癌癥)研究中的分析物。
采用多參數表面等離子體共振(MP-SPR)技術測定了人間充質干細胞(ADMSC)和溶菌酶蛋白在幾十微米厚的羥基磷灰石(HA)表面上的附著。羥基磷灰石是存在于牙齒和骨骼中的一種成分，其合成形式被廣泛用于骨科假體中，以增強種植體的骨整合。MP-SPR測量結果表明，細胞傾向于與HA涂層結合，而不是金涂層。
在另一項實驗中，開發了一種生物傳感器來檢測腫瘤細胞，測定乳腺癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF-10A)與表面結合的靶向肽(18-4)和參比肽的結合情況。生物傳感器表面能夠區分癌細胞和正常細胞。
簡介
在藥物發現和生物傳感器開發領域，通常需要確定生物分子相互作用。表面等離子體共振(SPR)是一種成熟的實時測量無標記分子相互作用的方法。強大的多參數表面等離子體共振(MP-SPR)儀器可以進行寬角度范圍(40-78度)和多個波長的測量，這將SPR的適用性擴展到組織工程和使用全細胞和納米顆粒的生物傳感。廣泛的測量范圍使得MP-SPR能夠測量比SPR場穿透深度厚得多的薄膜，例如微米厚的聚合物、陶瓷薄膜或活細胞。
圖一：A、研究了干細胞(AD-MSC)在陶瓷羥基磷灰石表面的結合對骨科假體發育的影響。
這影響結合率和細胞的粘附量，透明質酸有利于細胞附著，從而促進種植體骨整合。溶菌酶蛋白與透明質酸涂層緊密結合(圖四)。然而，部分蛋白質在漂洗過程中與表面分離，表明蛋白質和透明質酸涂層之間的相互作用相當弱。
圖四：溶菌酶在羥基磷灰石涂層上的結合動力學
癌細胞(MCF7)與靶肽的結合明顯強于與參比肽的結合(圖五)。兩種細胞類型均與參考肽表面結合，表明細胞對底物的非特異性結合程度較低。非癌細胞與目標肽的結合甚至低于與參考表面的結合，從而表明對癌細胞具有理想的肽選擇性。肽表面對癌細胞的敏感性低至5±3個細胞/mL。
圖五：癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF10A)與靶肽和參比肽的結合。癌細胞與靶向表面(紅色曲線)的結合明顯強于與非靶向表面(藍色曲線)的結合。
結論
MP-SPR測量細胞在幾微米厚的涂層上以及在表面固定的靶分子上的粘附性。這種實時技術適用于測量各種材料的結合動力學，從金屬(TiO2)和陶瓷(HA)到軟材料材料(PDMS)。MP-SPR測量在受控溫度(15至45°C)和靜態和動態流動條件下，從而使儀器強大并能為活細胞傳感。
采用多參數表面等離子體共振(MP-SPR)技術測定了人間充質干細胞(ADMSC)和溶菌酶蛋白在幾十微米厚的羥基磷灰石(HA)表面上的附著。羥基磷灰石是存在于牙齒和骨骼中的一種成分，其合成形式被廣泛用于骨科假體中，以增強種植體的骨整合。MP-SPR測量結果表明，細胞傾向于與HA涂層結合，而不是金涂層。
在另一項實驗中，開發了一種生物傳感器來檢測腫瘤細胞，測定乳腺癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF-10A)與表面結合的靶向肽(18-4)和參比肽的結合情況。生物傳感器表面能夠區分癌細胞和正常細胞。
在藥物發現和生物傳感器開發領域，通常需要確定生物分子相互作用。表面等離子體共振(SPR)是一種成熟的實時測量無標記分子相互作用的方法。強大的多參數表面等離子體共振(MP-SPR)儀器可以進行寬角度范圍(40-78度)和多個波長的測量，這將SPR的適用性擴展到組織工程和使用全細胞和納米顆粒的生物傳感。廣泛的測量范圍使得MP-SPR能夠測量比SPR場穿透深度厚得多的薄膜，例如微米厚的聚合物、陶瓷薄膜或活細胞。
圖一：A、研究了干細胞(AD-MSC)在陶瓷羥基磷灰石表面的結合對骨科假體發育的影響。
B、通過測定乳腺癌細胞MCF7與靶肽的結合，開發用于血液腫瘤檢測的生物傳感器。
實驗結果討論
羥基磷灰石(HA)在基質上形成數十微米厚的多孔層。掃描電鏡(SEM)測得其厚度為24±6 μm（圖二）。在金表面，細胞粘附在10分鐘內達到平臺值。相比之下，HA表面的結合明顯較慢，90分鐘后才達到平臺期（圖三）。AD-MSC細胞在羥基磷灰石表面的附著明顯強于金表面。多孔羥基磷灰石涂層的有效表面積大于金表面的有效表面積。
羥基磷灰石(HA)在基質上形成數十微米厚的多孔層。掃描電鏡(SEM)測得其厚度為24±6 μm（圖二）。在金表面，細胞粘附在10分鐘內達到平臺值。相比之下，HA表面的結合明顯較慢，90分鐘后才達到平臺期（圖三）。AD-MSC細胞在羥基磷灰石表面的附著明顯強于金表面。多孔羥基磷灰石涂層的有效表面積大于金表面的有效表面積。
圖二：在空氣中測量有和沒有HA涂層的TiO傳感器滑動的全SPR曲線
圖三：與金相比，AD-MSC細胞在羥基磷灰石(HA)上的粘附明顯更強。在金涂層上10分鐘即可達到平臺結合水平，而在HA涂層上則需要90分鐘以上。
這影響結合率和細胞的粘附量，透明質酸有利于細胞附著，從而促進種植體骨整合。溶菌酶蛋白與透明質酸涂層緊密結合(圖四)。然而，部分蛋白質在漂洗過程中與表面分離，表明蛋白質和透明質酸涂層之間的相互作用相當弱。
圖四：溶菌酶在羥基磷灰石涂層上的結合動力學
癌細胞(MCF7)與靶肽的結合明顯強于與參比肽的結合(圖五)。兩種細胞類型均與參考肽表面結合，表明細胞對底物的非特異性結合程度較低。非癌細胞與目標肽的結合甚至低于與參考表面的結合，從而表明對癌細胞具有理想的肽選擇性。肽表面對癌細胞的敏感性低至5±3個細胞/mL。
圖五：癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF10A)與靶肽和參比肽的結合。癌細胞與靶向表面(紅色曲線)的結合明顯強于與非靶向表面(藍色曲線)的結合。
結論
MP-SPR測量細胞在幾微米厚的涂層上以及在表面固定的靶分子上的粘附性。這種實時技術適用于測量各種材料的結合動力學，從金屬(TiO2)和陶瓷(HA)到軟材料材料(PDMS)。MP-SPR測量在受控溫度(15至45°C)和靜態和動態流動條件下，從而使儀器強大并能為活細胞傳感。
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