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解析:好的elisa試劑產品應該具有哪些特征

瀏覽次數:2020 發布日期:2017-5-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

一、有關產品固相載體

可作酶聯免疫吸附劑測定中載體的物質很多,例如:聚苯乙烯、聚氯乙烯、以含鐵的磁性微粒制作的、還有微孔濾膜,如硝酸纖維素膜、尼龍膜等。

最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或蛋白質抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。在酶聯免疫吸附劑測定測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學反應,所以被普遍采用。

酶聯免疫吸附劑測定載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應板。最常用的載體為微量反應板。良好的酶聯免疫吸附劑測定板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。

二、抗原和抗體

在酶聯免疫吸附劑測定實施過程中,抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵因素。

聯免疫吸附劑測定所用抗原有三個來源:天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養物等,一般含有多種抗原成分,需經純化,提取出特定的抗原成分后才可應用,因此也稱提純抗原。重組抗原和多肽抗原均為人工合成品,使用安全,而且純度高,干擾物質少。

用于酶聯免疫吸附劑測定的抗體有多克隆的和單克隆的。

三、免疫吸附劑

固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。由于載體的不同,包被的方法也不同。包被好的酶聯免疫吸附劑測定板在低溫可放置一段時間而不失去其免疫活性。

四、酶和底物

酶聯免疫吸附劑測定中所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質穩定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標抗體或抗原性質穩定,繼續保留著它的活性部分和催化能力。酶聯免疫吸附劑測定中最常用的酶為辣根過氧化酶(HRP)

五、結合物

酶標記的抗原或抗體稱為結合物。抗原由于化學結構不同,可用不同的方法與酶結合。如為蛋白質抗原,基本上可參考抗體酶標記的方法。

1. 戊二醛交聯法戊二醛是一種雙功能團試劑,可以使酶與蛋白質或其他抗原的氨基通過它而偶聯。戊二醛交聯可用一步法(如連接AP),也可用二步法(如連接HRP)。

2. 過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質結合,形成按摩爾比例結合的酶標結合物。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯最有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈,各批實驗結果不易重復。

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