中文名稱：Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit
產品規格：500T

AlamaBlue 細胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細胞生長的培養基中所產生的化學還原反應，將非熒光信號的染料轉換成為一紅色熒光物質，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細胞的存活率。維持細胞生產需要還原性環境而抑制生長則表現為氧化型環境。細胞生長率相關的降低可表現為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發波激發，在590nm 處可以獲發射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監測值，可以減去相應的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產生的熒光信號是與樣品中的活細胞數成正比的。

AlamaBlue 細胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細胞增殖法。根據不同類型的細胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個細胞，同時保證很好的重現性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當細胞數量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-0-氧化-三氫吩惡嗪）被轉換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細胞類型，應該調整您的細胞數，做相應的優化，才能得到更好的結果。

操作說明

以下操作可用作通用指導建議。考慮不同細胞類型與培養條件的差異性，有必要根據實際情況優化您的操作步驟。
. 96 孔細胞培養板每孔00μL 培養基飼養細胞，控制細胞數目在40~0000 個/貼壁細胞，2000~500000 個/懸浮細胞。設置空培養基做對照。
2. 加入0μL AlamaBlue 溶液至培養基中，37 度孵育：24 小時（比色法讀數）；5-6 小時（熒光讀數）。
3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數530nm 激發，590nm 發射波讀數。
4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請在校正OD 值后，先設置標準曲線，選擇合適您實驗的細胞最佳濃度。
Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒注意事項：
、懸浮細胞用此法時必須經離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細胞數成比例，也受作用時間的影響，因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時，請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作規程
、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00
 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)