事實(shí)：能使人生病的細(xì)菌、病毒等病原體幾乎無處不在，我們的身體無時無刻不處在病原體的包圍之中，但是通常情況下，我們并沒有感到不適。這是因?yàn)槲覀冇兄鴱?qiáng)大的免疫系統(tǒng)。

人體的免疫系統(tǒng)是一個復(fù)雜又神奇的存在，既能幫助人體有效抵御病原體的侵害，又能維持平衡不攻擊正常的人體細(xì)胞，人體免疫包括非特異性免疫和特異性免疫，其中特異性免疫簡單來說又分為體液免疫（B 細(xì)胞主導(dǎo)，通過分泌抗體來起作用）和細(xì)胞免疫（T細(xì)胞主導(dǎo)，通過分泌細(xì)胞因子來起作用）。在免疫反應(yīng)中，CD4+T細(xì)胞具有激活B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的功能，B細(xì)胞主要產(chǎn)生中和抗體，而CD8+T細(xì)胞主要在細(xì)胞免疫中通過分泌細(xì)胞因子來起作用，并產(chǎn)生記憶B細(xì)胞和記憶T細(xì)胞。機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體主要抑制病毒的進(jìn)一步感染，細(xì)胞免疫則主要對抗臨床癥狀。

疫苗即是通過誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫達(dá)到預(yù)防相應(yīng)傳染病的目的。因此，中和抗體和細(xì)胞免疫也是病毒疫苗有效性評價中非常重要的指標(biāo)。那么哪種方法可以評估疫苗引起的體液免疫和細(xì)胞免疫呢？ELISPOT可以給你答案：

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是將細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和ELISA技術(shù)相結(jié)合，可以原位地檢測培養(yǎng)細(xì)胞體外分泌蛋白的高靈敏分析技術(shù)。根據(jù)技術(shù)原理，主要分為T細(xì)胞與B細(xì)胞ELISpot兩種。其中T細(xì)胞ELISpot主要用于檢測刺激后細(xì)胞所分泌的痕量細(xì)胞因子，而B細(xì)胞ELISpot主要用于檢測抗體分泌B細(xì)胞的頻率。

A：將特異性抗原包被在培養(yǎng)孔底部捕獲IgG，用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測；

B：使用抗IgG的抗體進(jìn)行包被，用生物素偶聯(lián)的抗原進(jìn)行檢測；

C：總的IgG的檢測方法：使用抗IgG的抗體進(jìn)行包被，再使用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測。

B細(xì)胞ELISpot用于研究抗體分泌細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，主要包括感染后以及疫苗接種后應(yīng)答反應(yīng)的研究。目前，B細(xì)胞ELISpot是僅有幾個能夠直接關(guān)注抗體分泌細(xì)胞（ASCs）的檢測工具之一，而其他的分析方法多為檢測液體中游離的抗體。相比于其他檢測方法，研究人員借助B細(xì)胞ELISpot可以更準(zhǔn)確地識別出樣本中的ASCs，并測定出其數(shù)量及針對特異性抗原分泌的抗體數(shù)量。

T細(xì)胞的ELISpot

將特定指標(biāo)的抗體包被在培養(yǎng)孔底部捕獲對應(yīng)細(xì)胞因子，用生物素偶聯(lián)的抗體進(jìn)行檢測

T細(xì)胞ELISpot廣泛應(yīng)用于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答研究，如傳染性疾病，癌癥，過敏癥以及自身免疫性疾病的研究中，并且T細(xì)胞ELISpot也被視為為檢測和評價疫苗 有利的研究工具之一。在疫苗治療前后，如何準(zhǔn)確的定性，定量判斷抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)，評價療效是疫苗發(fā)展的關(guān)鍵。例如，Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4，IL-5以及IL-13。借助ELISpot測定疫苗治療前后T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞因子表達(dá)量變化來進(jìn)行疫苗評價。

ELISPOT技術(shù)優(yōu)勢

① 靈敏度高。在一百萬個陰性細(xì)胞中只要有一個分泌細(xì)胞因子的陽性細(xì)胞即可被檢測出來。這是目前為止，最為靈敏的檢測技術(shù)，靈敏度比傳統(tǒng)的ELISA方法高2-3個數(shù)量級。

② 單細(xì)胞水平。ELISpot檢測的是單個細(xì)胞分泌，而非細(xì)胞群體的平均分泌。

③ 功能學(xué)檢測。ELISpot檢測到的細(xì)胞因子不是在細(xì)胞正常狀態(tài)下就存在的，而是在檢測的過程中活細(xì)胞收到刺激物的刺激后分泌出來的。斑點(diǎn)的強(qiáng)弱和數(shù)量直接反映了細(xì)胞對刺激物的反應(yīng)能力和分泌細(xì)胞因子的能力。

④ 直觀、可信度高。結(jié)果直觀，一個陽性細(xì)胞對應(yīng)一個斑點(diǎn)。

Mabtech公司提供的B細(xì)胞ELISpot檢測指標(biāo)包括人，非人靈長類，小鼠，牛、豬等種屬的IgG，IgA，IgM以及IgE，下表僅列出人的做為參考，其他種屬的B細(xì)胞ELISpot檢測指標(biāo)，詳詢艾美捷科技。

當(dāng)然， Mabtech作為ELISpot、FluoroSpot和ELISA等免疫學(xué)相關(guān)研究的領(lǐng)導(dǎo)者，除了可以提供以上B細(xì)胞ELISpot檢測指標(biāo)，還可提供最全的T細(xì)胞ELISpot檢測指標(biāo): 白細(xì)胞介素IL（扒一扒白細(xì)胞介素（Interleukin）的家族秘密）、腫瘤壞死因子TNF（Mabtech腫瘤壞死因子-α的產(chǎn)品大集合啦）、干擾素IFN（IFN-γ ELISpot法：有效評估疫苗引起的細(xì)胞免疫效應(yīng)）等，更多細(xì)胞因子的ELISpot檢測指標(biāo)，詳詢艾美捷科技。

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