專題一: 利用Simoa平臺(tái)開發(fā)血漿p217+tau的高靈敏度檢測(cè)方法

Development and validation of a high-sensitivity assay for measuring p217+tau in plasma

Alzheimers Dement (Amst). 2021 May 27;13(1): e12204（IF=14.48）

兩步法與三步法檢測(cè)的比較 

對(duì)96例腦脊液（CSF）標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，兩步法和三步法的檢測(cè)結(jié)果緊密相關(guān)（r²  = 0.939）。對(duì)10個(gè)血清樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在兩步分析法中至少有4個(gè)樣本顯示異常高信號(hào)，而三步分析法比較穩(wěn)定。

樣品稀釋液的選擇和優(yōu)化 

使用不同的樣品稀釋液，用三步法檢測(cè)四個(gè)樣品（3個(gè)AD患者的血清樣品和標(biāo)準(zhǔn)品）的p217+tau濃度。結(jié)果可知，含HBR9的Tris稀釋液可減少磁珠聚集和假陽(yáng)性信號(hào)。

樣本適用性  

本研究檢測(cè)了10名健康對(duì)照者和16名輕中度癡呆患者的血清和血漿樣本。結(jié)果顯示，輕度至中度癡呆患者的平均濃度明顯高于健康對(duì)照組。然而，血漿樣本中的p217+tau的濃度約為血清樣本的2倍。

檢測(cè)穩(wěn)定性  

檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性  

本方法開發(fā)檢測(cè)血漿p217+tau具有良好的靈敏度和準(zhǔn)確度。5個(gè)質(zhì)控樣本（1個(gè)AD患者血漿pool樣、1個(gè)AD患者血清pool樣和3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液）分別進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果變異系數(shù)低（5%–15% CV）。對(duì)227名受試者（157名輕度至中度癡呆和70名認(rèn)知正常）的血漿樣本進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，平均組內(nèi)精確度為7.1%CV（98.2%的樣本的CV<20%）。

臨床應(yīng)用  

對(duì)16名淀粉樣蛋白陽(yáng)性癡呆患者的腦脊液和血漿中的p217+tau分別進(jìn)行檢測(cè)，顯示中度正相關(guān)（r² =0.43）。對(duì)227名受試者（69%的輕度至中度癡呆，31%的認(rèn)知正常）腦脊液和血漿中的p217+tau進(jìn)行檢測(cè)，也證實(shí)中度正相關(guān)（r² =0.35）。將樣本分為淀粉樣蛋白（A）陽(yáng)性（A+，n=160）或陰性（A-，n=50）受試者，顯示腦脊液與血漿相關(guān)性僅見于淀粉樣蛋白陽(yáng)性受試者（A+受試者與A-受試者的r²  = 0.27與0.01）。 

此外，血漿p217+tau可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)中樞淀粉樣蛋白陽(yáng)性和Tau陽(yáng)性。

總結(jié)  
血漿p217+tau的檢測(cè)是一種高度特異、精確、靈敏度高的方法，可以無(wú)創(chuàng)地檢測(cè)中樞淀粉樣蛋白和tau狀態(tài)，有望在不久的將來(lái)被納入AD的臨床檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中。