維也納獸醫(yī)大學的研究者們進行了一項回顧性研究，用以評估馬細小肝炎病毒EqPV-H在蒂勒氏病以外的組織病理學異常的馬和驢肝臟中是否存在及其相關性，研究者們希望通過該研究確認新發(fā)現(xiàn)不久的EqPV-H是否會導致其他的肝臟疾病，并且通過EqPV-H的感染情況進一步分析EqPV-H病毒的感染模式。

亮點：

1.通過采用新技術的回顧性研究，對之前收集的樣本進行分析，找到EqPV-H病毒可能與腫瘤性疾病存在關聯(lián)。

2. 憑借naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的直接絕對定量和對抑制劑的高耐受性，快速、高效的進行拷貝數(shù)的檢測，確定組織樣本中的病毒含量。

3.通過對不同部位病毒含量的檢測進一步佐證了EqPV-H病毒的嗜肝性，以及其慢性感染的可能性。

馬細小肝炎病毒是什么？

蒂勒氏病是一種與馬相關的急性、爆發(fā)性肝壞死疾病，該疾病1918年在南非發(fā)現(xiàn)，后續(xù)也不斷有馬出現(xiàn)該病，且主要與馬源性生物制品如馬血漿、破傷風和肉毒中毒抗毒素的給藥有關，因此推測該病應該與一種傳染性的病原體相關，但一直沒有找到該病原體。直到2018年，科學家在一匹接受破傷風抗毒素后死于蒂勒病的馬的血清和肝臟樣本中檢測到一種未知病毒，新發(fā)現(xiàn)的病毒被命名為馬細小病毒肝炎EqPV-H。通過對最近的蒂勒氏病例檢測發(fā)現(xiàn)，該病毒在染病馬匹中均存在。且該病毒具有嗜肝性，血清和肝中的病毒載量最高。其他方面的研究也支持了該病毒是蒂勒氏病的病原體的假說。

本文則主要通過對之前的標本進行分析，探尋EqPV-H作為一種新發(fā)現(xiàn)的病毒，其是否還有一些其他的病理作用，是否與其他肝臟疾病相關？

回顧性的EqPV-H檢測結(jié)果如何？

研究者們收集了各類因肝組織病理學異常的臨床樣本，將其分為7組，包括腫瘤疾病，炎癥性疾病、肝硬化、循環(huán)障礙、毒性和肝代謝疾病、多種疾病（1-5組中2種以上的病理學特征）和正常肝組織。在這些收集到的92例肝臟樣本中，只有2例發(fā)現(xiàn)了EqPV-H病毒，且兩例均診斷為腹部腫瘤。但癌癥與機會性感染的高易感性是相關的，因為腫瘤性疾病伴隨的全身虛弱和免疫抑制可能促進EqPV-H繼發(fā)感染，所以EqPV-H是否可能是馬科動物原發(fā)性肝腫瘤發(fā)生的誘因，需要進一步的研究來評估。

通過對這兩例樣本的進一步分析發(fā)現(xiàn)，在這匹馬的脾臟組織（腫瘤轉(zhuǎn)移部位）以及心臟和肺組織中也可以檢測到非常低的EqPV-H。這與之前的研究相一致，肝臟中病毒載量最高，其他組織中含量較低但也可持續(xù)存在，這意味著該病毒可能存在慢性感染。

進一步通過naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)對病毒的載量進行絕對定量分析，EqPV-H核酸陽性的兩個肝臟樣本，病毒載量分別為5×103和9.5×103GE/百萬細胞，略低于其他研究中肝臟樣本1.26×104GE/百萬細胞到2.04×109GE/百萬細胞的病毒載量，這可能是慢性感染的另一個跡象。

▲ naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測肝臟1號和2號樣本中EqPV-H和細胞校正基因TTC17絕對定量結(jié)果。

由于這項研究是回顧性的，所有的組織樣本在室溫下被石蠟包埋1至17年，這可能會影響可檢測病毒的數(shù)量。但仍然在其中2匹腫瘤性疾病的馬樣本中檢測到EqPV-H病毒，這表明EqPV-H感染和腫瘤性疾病之間可能存在關聯(lián)甚至相互作用。

盡管這篇文章最終并未得出某種疾病與EqPV-H的確切關系，但是通過naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)這樣的新技術和新發(fā)現(xiàn)的病毒EqPV-H對以前的樣本進行回顧性研究，仍然發(fā)現(xiàn)了一些之前從未了解到的新內(nèi)容，也為其他的研究提供了新的思路和方向。

期刊《viruses》

Viruses (ISSN 1999-4915) 是一個國際性開放獲取期刊， 至今已被SCIE、PubMed 、Scopus等各類數(shù)據(jù)庫索引，其最新影響因子為3.465。作為病毒學研究的高級論壇，該期刊旨在幫助研究人員細致的展示他們的前沿發(fā)現(xiàn)和觀點，并使其迅速傳播。

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法國Stilla Technologies公司的naica^®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)在進行核酸檢測時具有獨特的優(yōu)勢。該系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進入2D芯片中。3色熒光檢測儀器，整個流程只需要2.5小時，并可進行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析，獲得的數(shù)據(jù)真實可靠。

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