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間充質干細胞成脂誘導方法介紹

瀏覽次數:658 發布日期:2023-7-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
        干細胞是一類具有自我復制能力的多潛能細胞,未充分分化尚不成熟,在一定條件下可以分化成多種功能細胞。脂肪干細胞是從脂肪中分離得到的多分化潛能的干細胞,通過一定條件培養可以生長為成熟的脂肪細胞產生脂滴,為科研工作者研究脂肪相關課題提供良好的細胞模型,目前此模型應用廣泛,相關機制研究也非常多。
目前已發表研究發現,脂肪間充質干細胞誘導成脂過程的方法有2種:
  1. 地塞米松、胰島素以及IBMX等試劑配制的溶液進行間斷培養;
  2. 商業化的成品成脂誘導試劑盒,其中包括了分化培養基維持液和分化培養基誘導液;
上述2種方式均可誘導干細胞形成脂滴,一般需要14-21天,最終以油紅O染色判斷脂滴形成情況。
 
實驗應用:
(1)肥胖與代謝疾病研究:成脂誘導實驗可以用于研究肥胖和相關代謝疾病的發生機制,如糖尿病、高血壓等。通過觀察和分析脂肪細胞的發育和功能變化,可以揭示這些疾病的潛在機制。
(2)藥物篩選:成脂誘導實驗可以用于篩選潛在的抗肥胖藥物或改善代謝疾病的藥物。通過觀察藥物對脂肪細胞發育和功能的影響,評估其藥效和作用機制。
(3)營養與健康研究:成脂誘導實驗可以用于研究不同營養因子和環境因素對脂肪細胞發育和代謝的影響,探究營養與健康之間的關系。
總之,成脂誘導實驗在肥胖、代謝疾病、藥物研發和營養健康等領域具有廣泛的應用前景。
 
 
實驗步驟:以成品商業化誘導試劑盒步驟為例
(1)加 1 mL 0.1%明膠到六孔板中,搖勻,使其能均勻覆蓋各孔底面。
(2)將鋪有0.1%明膠的六孔板放置在超凈臺或 CO2 培養箱至少 30 min。
(3)30 min后吸去明膠即可用于接種細胞,或等待六孔板晾干再接種。
(4)將待誘導的大鼠脂肪間充質干細胞按照 2×104 cells/cm2 的細胞密度接種于六孔板中,每孔加入 2mL 普通完全培養基。
(5)細胞置于 37℃、5%CO2、飽和濕度的 CO2 培養箱中培養。
(6)當細胞匯合度達到 100%時,小心地將孔內完全培養基吸走,向六孔板中加入 2 mL 成脂誘導分化培養基。
(7)誘導 3 天后,吸去六孔板中的 A 液,加入 2 mL分化培養基維持液;
(8)維持 1 天后,吸去維持液,換回誘導液進行誘導。
(9)維持液和誘導液交替使用,期間需每天觀察細胞狀態。重復誘導和維持過程,直到出現足量、大小適宜的脂滴,即可準備染色。
 
 
發布者:北京至真科言生物科技有限公司
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標簽: 成脂誘導
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