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人類永生化表皮細胞HaCaT培養攻略

瀏覽次數:1058 發布日期:2023-9-6  來源:absin

HaCaT細胞是人類永生化表皮細胞,由角質形成細胞培育而來的,保留了角質形成細胞分化能力,是非腫瘤來源的人正常皮膚永生化角質形成細胞株,與正常人角質形成細胞分化特性相似,可以繁殖150代以上,但不是腫瘤細胞,不具有腫瘤特性。

 

細胞名稱

HaCaT(人永生化角質形成細胞)

細胞來源

一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚

形態

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

營養體系

89%MEM+10%胎牛血清優級+1%雙抗)+0.2%牛腦垂體提取物

傳代

1:3—1:5,傳代周期2-3天

凍存

無血清細胞凍存液plus/ 90%完全培養液+10%DMSO

應用

皮膚生物學和分化研究

 


該細胞較難消化,胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚紅消化5min作用,有時可能高達10min,主要由于細胞不同分化程度和融合度而異。注意消化前一定要用PBS清洗細胞2-3次,鋪板時一定要均勻,因為HaCat成片生長,鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化,生長稀疏部分容易消化過度的情況。


圖a 低Ca2+條件下HaCat細胞基礎狀態和圖b高Ca2+條件下HaCat細胞分化狀態

 

10%FBS培養體系中的Ca2+足以誘導該細胞分化,也就是說,正常培養體系下,該細胞會逐漸分化,分化前細胞近紡錘形,排列較松散,分化后細胞向立方體發展,排列緊密,呈片狀生長。



 

低鈣離子條件下,HaCat增殖更快,K14的表達僅限于表皮基底層,而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通過免疫熒光實驗證實了HaCat細胞分化表型的獲得,與第6天相比,分化標記K10在HaCaT細胞中的表達在第14天顯著增加,幾乎100%的細胞是陽性的,這可能和細胞密度有關。

 

牛腦垂體物常用作無血清細胞培養的生長補充劑,可促進上皮細胞、內皮細胞和黑色素細胞增殖,廣泛用作各種上皮細胞和黑色素細胞培養中的補充劑。此外,其具有抗氧化能力,可對抗過氧化氫誘導的細胞壞死,蛋白質氧化,膜破碎和DNA損傷。

發布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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