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FISH熒光原位雜交技術——捕獲基因位、量的“釣魚”工具

瀏覽次數:916 發布日期:2024-5-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

熒光原位雜交是一種生物技術,行業內簡稱FISH(Fluorescence In Situ Hybridization),被廣泛應用于生物醫學研究和臨床診斷領域。其原理簡潔而強大,可以幫助使用者準確地定位和分析細胞或組織中特定DNA序列的位置和數量,為研究基因組的結構、功能和異常提供了重要的手段,所以說,FISH是揭示基因位置與數量的強大工具。
 

要想使用好這個工具,就不得不說說它的生物學原理。高中生物讓我們學到了生命重要的遺傳物質--DNA(脫氧核糖核酸),它是由特定的堿基序列配對形成的雙螺旋結構,也就是A(腺嘌呤)—T(胸腺嘧啶)配對,G(鳥嘌呤)—C(胞嘧啶)配對。FISH熒光原位雜交技術的核心在于使用熒光標記的DNA探針與待檢測樣品中的目標DNA序列發生特異性的互補配對,在進行FISH熒光原位雜交之前,DNA雙螺旋結構經過處理分解為單鏈的目標DNA,而探針DNA通過人工合成或PCR擴增并在其一端標記上熒光染料,在特定的溫度和鹽濃度下形成探針—目標DNA配對這樣的雙鏈結構,然后對樣品進行洗脫,洗去未結合的探針染料(減少背景雜光干擾),而結合上的熒光染料標記的探針會發出特定顏色的熒光信號。
 

利用DNA堿基對的互補性,將直接標記了熒光的單鏈DNA(探針)和與其互補的目標樣本的DNA(玻片上的標本)雜交,通過觀察熒光信號在染色體上的位置反映相應染色體的情況。

 

最后,使用熒光顯微鏡下通過使用染料對應的熒光波段觀察樣品。熒光染料標記的探針會發出特定顏色的熒光信號,用于定位和分析目標DNA序列的位置和數量,因其特異性結合原理可以“釣出”所需的堿基序列,也常被稱為生命科學界的“釣魚”技術。
 


 

FISH技術在許多領域都有著廣泛的應用,包括:基因組學研究、腫瘤學診斷、胚胎學研究、微生物學研究等,FISH技術為科學家們提供了深入探索生命本質的窗口,為疾病的診斷和治療提供了重要支持。其對HER2、EGFR、TP53基因擴增的檢測具有較高的靈敏度,其特定的工作原理可以診斷DNA序列的位置和數量,對染色體缺失、重復、倒位等遺傳疾病的診斷和研究具有重要意義,FISH熒光原位雜交技術以其高分辨率、高特異性和廣泛適用性而成為生物醫學領域中的重要工具。所以近幾年醫院在胃癌、乳腺癌和產前診斷方面的FISH項目如火如荼開展,FISH技術及其相關產業在國內外蓬勃發展。
 

熒光顯微鏡檢做為FISH檢測最后一道關鍵工序,在推進FISH技術的進程中扮演著不可或缺的角色。Mshot明美開發了FISH熒光鏡檢的整套解決方案,這其中包括Mshot明美科研級正置熒光顯微鏡MF43-N以及專用于FISH檢測的醫學影像處理軟件系統Mshot V2.0,醫學影像處理軟件系統配套了2100萬像素科研級制冷高分辨率、高靈敏度、高特異性的熒光攝像頭,軟件具有自動熒光信號點提取、景深擴展、多通道融合及自由報表等功能,打通FISH樣片熒光檢測—圖像處理—出具報告這條完整產線的應用需求。其中強大的自動熒光信號點提取功,可以將提取出的信號點不丟失、亮度不減弱,快速且準確,大大提升了FISH圖像處理效果以及FISH圖像處理效率。以下是FISH熒光信號點一鍵提取功能的效果演示。
 


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