DAPI染色液的使用方法及注意事項(xiàng)

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DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化幾乎適用于所有常見(jiàn)細(xì)胞和組織細(xì)胞核染色的染色液。DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C₁₆H₁₅N₅·2HCl，分子量為350.25，CAS Number 28718-90-3。DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的最大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后最大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。 DAPI染色液用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

保存條件： -20℃避光保存

使用說(shuō)明：

1、對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行DAPI染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的DAPI染色。

2、對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。

3、室溫放置3-5分鐘。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

注意事項(xiàng)：

1、DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2、熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。