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NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)活性分析試劑盒原理及應(yīng)用介紹

瀏覽次數(shù):7868 發(fā)布日期:2016-3-16  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

NF-κB/Rel轉(zhuǎn)錄因子家族包含幾種結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白(p65/p105,p52/p100,RelA(p65),c-Rel/ NF-κB)形成同源和/或異源二聚體。該轉(zhuǎn)錄因子家族成員調(diào)控超過150種目的基因,包括炎癥細(xì)胞因子、趨化因子、免疫受體、細(xì)胞粘附分子等的表達(dá)。正因?yàn)槿绱耍琋F-κB被認(rèn)為是“免疫應(yīng)答的中心調(diào)節(jié)物”。作為二聚體,這些轉(zhuǎn)錄因子與DNA序列結(jié)合(這些結(jié)合位點(diǎn)被稱為“κB位點(diǎn)”),從而調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)。在大多數(shù)細(xì)胞中,NF-κB/Rel轉(zhuǎn)錄復(fù)合物以未活化的形式存在于胞漿中,與抑制劑IκB結(jié)合。當(dāng)細(xì)胞受到刺激后,一些列的磷酸化、泛素化反應(yīng)導(dǎo)致IκB降解,NF-κB轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)入細(xì)胞核。

由于NF-κB轉(zhuǎn)錄因子在人類炎癥反應(yīng)和其他疾病中的重要作用,吸引了越來越多研究者的目光,而細(xì)胞中NF-κB各亞基活性的檢測是NF-κB研究中必不可少的一步!

怎樣安全、方便、有效的檢測細(xì)胞中NF-κB各亞基活性呢?

艾美捷給出了答案:NF-κB (p65) Transcription Factor Assay Kit(貨號:10007889)及NF-κB (human p50) Transcription Factor Assay Kit(貨號:10006912)。在前期的樣本處理中,還可以使用細(xì)胞核提取試劑盒(Nuclear Extraction Kit,貨號:10009277)。

 
微孔板預(yù)先包被含有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)的dsDNA寡核苷酸,加入細(xì)胞核提取物,使NF-κB蛋白結(jié)合到dsDNA上,洗滌除去未結(jié)合組分,先后加入NF-κB特異性抗體和HRP標(biāo)記的二抗。加入酶底物后,通過酶促反應(yīng),讀取OD450值來定量樣本中NF-κB的活性。
 
 
圖2:NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒原理展示
 
 
●取代了傳統(tǒng)的凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA),基于ELISA反應(yīng)原理可實(shí)現(xiàn)大量樣本的快速高通量檢測
●在DNA與蛋白質(zhì)相互作用的水平檢測NF-κB活性,能夠檢測出細(xì)胞內(nèi)真正處于活化狀態(tài)的NF-κB
●試劑盒中分別含有NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉(zhuǎn)錄因子陽性對照
●NF-κB(p65)轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒可檢測人、小鼠及大鼠的NF-κB(p65),不與NF-κB(p50)發(fā)生交叉反應(yīng);NF-κB(p50)轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒可檢測人NF-κB(p50),不與NF-κB(p65)發(fā)生交叉反應(yīng)
 
 
圖3:NF-κB(p50)/ NF-κB(p65)轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒結(jié)果展示
發(fā)布者:艾美捷科技有限公司
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