通用型HRP-AEC底物顯色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

通用型HRP-AEC底物顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，底物3-氨基-9-乙基咔唑氧化形成紅色不溶性產物，以此鑒定過氧化物酶活性，進而確定目標分子表達的權威而經典的技術方法。其適用于辣根過氧化酶標記蛋白的免疫學檢測包括蛋白質西方雜交和免疫化學，以及原位雜交染色等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復性好。

技術背景

3-氨基-9-乙基咔唑（3-amino-9-ethylcarbazole；AEC）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，其分子式為C14H14N2，分子量為210.3。在過氧化物酶的催化下，電子供體AEC底物在過氧化氫氧化下，失去電子而呈現出顏色變化和沉積，形成穩定性紅色不溶性產物，但溶解于有機溶劑中。被用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好。

產品內容

染色液（Reagent A）  5毫升

稀釋液（Reagent B） 90毫升

反應液（Reagent C）     5毫升

產品說明書      1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent A），避免光照；有效保證6月

用戶自備

無離子水：用于清洗樣品

PBS緩沖溶液：用于清洗樣品

蘇木素復染試劑盒（80067.2）：用于常規染色后復染

15毫升錐形離心管：用于染色工作液配制的容器

平式搖蕩儀：用于孵育和混勻反應

2.2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器

光學顯微鏡：用于染色后觀察分析

實驗步驟

• 免疫印跡染色

實驗開始前，移取500微升染色液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，加入9毫升稀釋液（Reagent B），混勻后，加入500微升反應液（Reagent C），混勻后，標記為染色工作液，避免光照。然后進行下列操作。

• 準備好含有待測蛋白的固相膜（5 X 8 cm²）：包括電泳、轉印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 加入5毫升室溫預熱的染色工作液，鋪滿整個固相膜表面
• 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育5至10分鐘，或直至紅色沉淀出現；避免光照
• 用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗
• 空氣中晾干
• 數碼相機拍照記錄

• 免疫化學染色

實驗開始前，移取100微升染色液（Reagent A）到2.2毫升離心管，加入1.8毫升稀釋液（Reagent B），混勻后，加入100微升反應液（Reagent C），充分混勻，標記為染色工作液，置于暗室。然后進行下列操作：

• 準備好含有待測蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 室溫下，小心加上100微升的染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現紅色
• 小心移去切片上的染色工作液
• 室溫下，小心將切片置入50毫升用戶自備的PBS緩沖溶液中浸泡5秒
• 小心移去切片上的PBS緩沖溶液
• （選擇步驟）進行蘇木素復染（注意：建議使用蘇木素復染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性呈現紅色

注意事項

• 本產品為10次（10毫升/次）或1000次（100微升/次）操作
• 可用于1000 cm²免疫印跡膜片：建議5毫升用于1張5 X 8 cm²膜片 
• 可用于1000片1 cm X 1 cm大小的組織切片
• 用戶可以根據需求，調整試劑用量
• 操作時，須戴手套
• 染色時間根據情況調整，不宜過長，以免造成過度顯色
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 染色工作液新鮮配制，不宜超過1小時；如果發現沉淀，不宜使用
• 固相膜染色后數小時將會褪色，不能永久存在
• 本產品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標記的雜交和沉淀反應
• 染色后可用蘇木素復染，增強對比度；建議使用 MAYER’S蘇木素復染試劑盒－80067.2
• 染色后不能使用乙醇等有機溶劑清洗
• 本公司提供系列組化染色試劑

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰