如果你曾經(jīng)做過(guò)SDS-PAGE和Western blotting實(shí)驗(yàn)，你肯定會(huì)看到彎曲的或模糊的條帶，不同于你的抗體數(shù)據(jù)表上顯示的那些完美的條帶形狀。雖然這些彎曲的條帶本身并不吸引人，但它們會(huì)影響到分子量，這可能會(huì)影響到條帶密度測(cè)量的分析，尤其是在使用自動(dòng)化程序或分析分子量相近的蛋白

不要擔(dān)心，通常您可以采取五個(gè)非常簡(jiǎn)單的步驟，使您的完美印跡再次呈現(xiàn)。

清潔實(shí)驗(yàn)器材

你花了幾個(gè)星期的時(shí)間來(lái)培養(yǎng)你的稀有細(xì)胞，用昂貴的新化合物來(lái)處理它們，小心地收集和溶解你的樣本，然后卻把你的凝膠放在兩個(gè)臟的玻璃板之間。所以要確保你的玻璃板和梳子在鑄造之前是干凈的，這是確保你鑄造完美凝膠非常重要的一步驟。

搖動(dòng)和攪拌

凝膠鑄造的一個(gè)主要問(wèn)題是不適當(dāng)?shù)幕旌显噭�，特別是丙烯酰胺。為了確保在凝膠中均勻地分離蛋白質(zhì)，需要確保一個(gè)恒定的丙烯酰胺百分比。但同樣的，你也要盡可能快地將配好的膠用于實(shí)驗(yàn)。一次徹底的混合凝膠試劑，接著是同樣重要的脫氣步驟，每次都能給你純潔的凝膠。

保持試劑新鮮

相同的方式，緩沖buffer確保它們是新鮮的,重要的是調(diào)整到正確的PH值。我們經(jīng)常發(fā)現(xiàn)我們的western blotting是重復(fù)不出來(lái)，使用將近6個(gè)月不新鮮的緩沖buffer，并將buffer一直放在陽(yáng)光下，可能把buffer扔掉重新配置更有意義。 至少要檢查一下buffer的pH值是必須的，因?yàn)樗�在您的蛋白質(zhì)遷移中通過(guò)凝膠發(fā)揮重要作用。

低電壓慢跑

如上所述，我們知道你希望盡快獲得令人興奮的結(jié)果，以高電壓運(yùn)行您的凝膠可能會(huì)導(dǎo)致您不得不再配膠并重新運(yùn)行樣品。 通過(guò)在高電壓下運(yùn)行你的凝膠，緩沖液和凝膠會(huì)變熱，這是您的凝膠翹曲和彎曲的主要原因。

上樣要適中

減少關(guān)于條帶彎曲和更多關(guān)于印跡，這一步對(duì)于確保您從印跡獲得最準(zhǔn)確的結(jié)果至關(guān)重要。 盡管在最大體積中加載最大濃度蛋白質(zhì)是有誘惑力的，但有時(shí)候減少上樣量，可以確保您獲得一個(gè)不錯(cuò)的條帶而不是無(wú)法辨認(rèn)的印跡。使用新的抗體，甚至是新的抗體批次，需要運(yùn)用總蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行測(cè)試。 這個(gè)簡(jiǎn)單的步驟可以節(jié)省您的時(shí)間和樣品，使您的分析更快捷。

在這五個(gè)步驟之后，你可以讓你的條帶變得銳利，讓它們成為你的實(shí)驗(yàn)室的驕傲。