腫瘤壞死因子α含量檢測方法及操作步驟（犬TNF-α）

瀏覽次數：6657　發布日期：2019-4-8　來源：上海仁捷生物科技有限公司

腫瘤壞死因子α含量檢測方法及操作步驟（犬TNF-α）

英文名稱：Canine TNF-α ELISA Kit
實驗類型：夾心法
檢測范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL
最低檢測限：0.1 pg/mL
應用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細胞培養物上清或其它相關液體（本產品僅供實驗室科研及非臨床用途）

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被犬腫瘤壞死因子α（TNF-α）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬腫瘤壞死因子α（TNF-α）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

注意事項

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。