HPLC－MS/MS法在檢測大鼠乳腺微透析液中環磷酰胺濃度的應用

瀏覽次數：1293　發布日期：2022-8-31　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

環磷酰胺（Cyclophosphamide）是臨床上最常用的一種烷化劑類抗腫瘤藥，廣泛用于治療惡性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌等，具有一定的化療效果。環磷酰胺是一個典型的前體藥物，體外無活性，在肝中被細胞色素P450氧化酶氧化，生成活化型的磷酞胺氮芥發揮抗腫瘤作用，屬細胞周期非特異性藥物。目前，國內環磷酰胺血漿濃度的測定方法主要是GC法和 HPLC法，但耗時較長，檢測限偏高。此外，血藥濃度結果不能準確反映靶標部位的治療情況。微透析技術是近年發展起來的一種新型活體靶標取樣技術。本研究旨在建立HPLC－MS法測定大鼠乳腺微透析液中環磷酰胺的濃度。

微透析技術可監測靶部位組織細胞外的游離藥物濃度，因此，監測組織中藥物的濃度比傳統血藥濃度的定量結果更具預測性。本次實驗微透析系統包括CMA150型動物保溫墊、CMA402型微量注射泵、MAB85型低溫樣品收集器、CMA30型線性微透析探針（分子截留值６KU，透析膜長１CM），均購自美國CMA公司。

微透析樣品收集及處理

1、探針體外校正　

以林格氏液沖洗探針后，將線性微透析探針浸入裝有100ｍｌ林格氏液的微透析反應瓶中，分別以不用濃度的藥物（cin,1.0、0.4、0.8μg/ml）作為灌流液，其他條件不變，收集的樣品在所建立的HPLC－MS/MS條件下測定透析液中藥物濃度。通過減量法計算環磷酰胺的體外探針回收率,Ｒ=（cin－cout）/cin，結果為（53.32±1.23）％。

2、微透析樣品收集　

大鼠用水合氯醛按體重（0.4ml/100ｇ,ip）麻醉，腹部朝上固定于保溫墊上，使其體溫保持在37.5℃。用脫毛膏去除胸部毛，15min后，暴露大鼠乳頭，用直尺準確量取探針透析膜進出的長度。將線性微透析探針用18Ｇ穿刺針引導平行植入乳腺組織后，抽回引導針并將探針留于組織中，然后將探針與微透析裝置相連。以2μl/ml的流速向其中泵入林格氏液作為灌流液，排除氣泡并沖洗管路30min，再以1.0μl/ml的流速向微透析探針中泵入林格氏液，平衡１ｈ后，收集空白透析液。將注射用環磷酰胺用生理鹽水溶解，尾靜脈注射給藥，一次性給予0.20mg/g。以冷凍樣品收集器連續收集透析液，采樣間隔30min，溫度4℃，持續采樣2ｈ。

3、樣品處理

精密量取透析液樣品20μｌ，加入內標溶液10μｌ，渦旋10ｓ，進樣2μｌ。