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naica®微滴芯片數字PCR在量化Dravet綜合征中R613X的轉錄水平的應用

瀏覽次數:1908 發布日期:2023-5-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

導讀

Dravet綜合征(Dravet)是一種嚴重的先天性發育遺傳性癲癇,由SCN1A基因的新生突變引起。在約20%的患者中發現了SCN1A無義突變,并且在多個患者中鑒定出SCN1A R613X突變。以色列特拉維夫大學Sagol神經科學學院、賽克勒醫學院人類分子遺傳學和生物化學系、Goldschleger眼科研究所研究者在bioRxiv平臺發表了題為《Heat-induced seizures, premature mortality, and hyperactivity in a novel Scn1a nonsense model for Dravet syndrome》的文章。

作者構建了含有無義Scn1a突變的Dravet小鼠模型,該模型中雜合Scn1a R613X突變表現出自發性癲癇發作、對熱誘導癲癇發作的易感性和過早死亡,概括了Dravet的核心癲癇表型。在該研究中,作者使用naica®微滴芯片數字PCR系統進行了WT Scn1a和R613X mRNA等位基因特異性定量。

應用亮點:

▶ naica®微滴芯片數字PCR系統精確量化了Dravet小鼠模型中WT Scn1a和R613X mRNA等位基因的含量。

▶ 在雜合子動物中,naica®微滴芯片數字PCR系統精準定量到穩定R613X轉錄水平為野生型的8.9±0.9%,表明突變等位基因的轉錄物在皮質組織中經歷了無意義介導的RNA衰變(nonsense -mediated RNA decay, NMD)。

這項研究為了定量評估皮質中R613X轉錄物的水平,使用naica®微滴芯片數字PCR系統對WT Scn1a和R613X等位基因進行了特異性檢測。

研究結果:

naica®微滴芯片數字PCR系統在WT小鼠的皮質組織中未檢測到R613X等位基因,證實了該方法的特異性(圖A)。與WT皮質相比,在Scn1aWT/R613X組織中檢測到WT等位基因的水平約為一半,這與雜合子動物的預期一致(圖B)。在雜合子動物中,穩定的突變體R613X轉錄為8.9±0.9% (圖C),比預期的50%水平低得多,這表明突變等位基因的轉錄物在皮質組織中經歷了強烈的無義介導的衰變(NMD)。

▲圖.Scn1aWT/R613X小鼠皮質中Scn1a mRNA表達降低。A. 來自WT小鼠的皮質組織顯示沒有可檢測到的R613X等位基因轉錄物,證明該等位基因檢測的特異性。B. 在Scn1aWT/R613X小鼠的皮質組織中,WT Scn1a等位基因為WT皮質中的48.8%。C. R613X與WT等位基因的比值顯示Scn1aWT/R613X動物中Scn1a R613X等位基因的平均穩態水平為WT等位基因的8.9±0.9%。

原文鏈接如下:https://doi.org/10.1101/2023.02.01.526678

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發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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