CASY，不僅是細(xì)胞計(jì)數(shù)的利器，還在細(xì)胞存活率和毒性測(cè)量方面大顯身手。最新研究揭示了它在評(píng)估抗癌藥物的細(xì)胞毒性方面的潛力，為設(shè)計(jì)更有效的多藥治療方案帶來(lái)了新思路。

在最近的一項(xiàng)名為“CASY在癌細(xì)毒性和化療敏感性中的應(yīng)用——抗癌藥物組合治療癌癥”的研究中，CASY被用于評(píng)估抗癌藥物結(jié)合化療的細(xì)胞毒性，旨在設(shè)計(jì)具有更寬治療窗口的新型多藥治療方案。

研究案例：新藥物組合的細(xì)胞毒性評(píng)估
在Weinreich等人最近的一項(xiàng)研究中（1）。作者檢查了接受胃癌標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)藥物方案（ECF）以及新型雙聯(lián)藥物（D-D）多化療方案治療胃腺癌細(xì)胞系和非惡性細(xì)胞系。

使用CASY生長(zhǎng)抑制測(cè)定評(píng)估了藥物組合的效果：400 μL稀釋后的細(xì)胞懸液重復(fù)測(cè)量三次，藥物的細(xì)胞毒性效應(yīng)被計(jì)算為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)活細(xì)胞數(shù)量與經(jīng)過(guò)各種藥物組合孵育5、10和14天后的細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的相對(duì)比例。CASY評(píng)估窗口設(shè)置為僅包括活細(xì)胞，并且排除死細(xì)胞。

來(lái)自德國(guó)圖賓根大學(xué)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)的 J. Weinreich 博士：使用CASY進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)定能夠快速、簡(jiǎn)單且可靠地評(píng)估抗癌藥物療法及其后續(xù)癌細(xì)胞系的化療敏感性。CASY的一個(gè)主要優(yōu)勢(shì)是通過(guò)簡(jiǎn)單的細(xì)胞系特異性設(shè)置可以屏蔽分析中的碎片和死細(xì)胞，僅考慮活細(xì)胞及其聚集體。然而，由于記錄了細(xì)胞的完整狀態(tài)，所以死細(xì)胞和細(xì)胞碎片的數(shù)據(jù)在任何時(shí)候都是可用的。

1.體外生長(zhǎng)曲線

圖1：ECF對(duì)于胃癌細(xì)胞系(MKN-45和23132/87)與非惡性細(xì)胞系(NHDF和23132/87)的生長(zhǎng)抑制是劑量依賴型的,抑制效果不顯著

2.使用多種組合化療方案處理細(xì)胞14天后的增長(zhǎng)率

圖2：?jiǎn)为?dú)使用D-D來(lái)作用于胃癌細(xì)胞系MKN-45和23132/87，其抑制效果不顯著，而且對(duì)于非胃癌細(xì)胞系的NHDF和CCL-241作用不抑制反而促進(jìn)。EC D-D對(duì)于胃癌細(xì)胞系MKN-45的抑制效果顯著，對(duì)于非胃癌細(xì)胞系的抑制效果不顯著

3.MKN45的細(xì)胞計(jì)數(shù)

圖3：Day 0，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始。存活率=95.6%，活細(xì)胞濃度為2.7×10⁶/mL。圖解：LML:活細(xì)胞數(shù)/mL；VIA:%存活率；AGG:聚集；CL，CR：評(píng)估游標(biāo)；NL，NR：標(biāo)準(zhǔn)化游標(biāo)
 

圖4：Day 7,PBS對(duì)照組。活率=90.3%；活細(xì)胞濃度為7.6×10⁶ /mL
 

圖5：MKN45細(xì)胞計(jì)數(shù)的CASY截圖。Day 7，0.86 μmol/L D-D。活率=92.4%；活細(xì)胞濃度9.5×10⁵ /mL
 

圖6：使用EC D-D處理后的MKN-45細(xì)胞的細(xì)胞增長(zhǎng)曲線。

red: E=0,37; C=0,45; D-D=0,41 μmol/L
pink: E=0,15; C=0,18; D-D=0,16 μmol/L
blue: E=0,075;C=0,09; D-D=0,082 μmol/L
yellow: PBS control

結(jié)果
評(píng)估新藥物組合。大體上，通過(guò)CASY分析能夠監(jiān)控細(xì)胞系對(duì)聯(lián)合藥物方案的類型和數(shù)量的特異性化學(xué)敏感性。一種新的雙聯(lián)藥物（D-D）（替代標(biāo)準(zhǔn)ECF組合中的5-FU）已顯示出對(duì)惡性胃腺癌細(xì)胞系的效果比對(duì)非惡性細(xì)胞系的效果更好，有望成為胃腺癌治療的前沿替代方案。

結(jié)論
CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞毒性分析顯示，一種新的EC D-D抗癌藥物療法有望成為胃腺癌治療的前景替代方案，取代了標(biāo)準(zhǔn)的ECF三聯(lián)藥物組合。通過(guò)CASY分析，我們揭示了胃癌和非惡性細(xì)胞系對(duì)各種藥物組合的敏感性差異，從而評(píng)估了藥物混合物的抗癌潛力。

啟示
CASY分析的高度特異性化學(xué)敏感性為研究人員提供了深入了解藥物組合對(duì)不同細(xì)胞系影響的機(jī)會(huì)，為精準(zhǔn)治療的發(fā)展貢獻(xiàn)力量。

參考文獻(xiàn)✦
1. Weinreich J, Archid R, Bajaeifer K, Hack A, Königsrainer A, Schott TC.Growth and Chemosensitivity of Gastric Adenocarcinoma and Non-Malignant Cell Lines in Response to Novel Anti-Cancer Drug Combinations. Chemotherapy. 2014; 60(5-6):346-352.

NCBI中的文獻(xiàn)索引號(hào)：DOI: 10.1159/000438943.