方案摘要：菌落總數(shù)測(cè)定是食品微生物檢測(cè)非常重要的一個(gè)項(xiàng)目，該項(xiàng)目的檢測(cè)是用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過(guò)程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。自動(dòng)培養(yǎng)基制備器通過(guò)自動(dòng)化技術(shù)實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)基的精準(zhǔn)配制、滅菌和分裝，顯著提升檢驗(yàn)效率與標(biāo)準(zhǔn)化程度。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
       利用培養(yǎng)基提供微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境（如碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水等），使食品中存活的微生物在適宜條件下繁殖形成可見(jiàn)菌落。通過(guò)平板計(jì)數(shù)法（如傾注法、涂布法）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量，反映食品的微生物污染程度。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、儀器和設(shè)備
①  恒溫培養(yǎng)箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
②  冰箱：2 ℃~5 ℃。
③  恒溫裝置：48 ℃±2 ℃。
④  天平：感量為 0.1 g。
⑤  均質(zhì)器。
⑥  振蕩器。
⑦  Pipetty電動(dòng)移液器：10ML量程、1ML量程。
⑧  無(wú)菌錐形瓶：容量 250 mL、500 mL。
⑨  無(wú)滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑩  pH 計(jì)或 pH 比色管或精密 pH 試紙。
⑪  蠕動(dòng)泵分液器：fluidot  600D。
⑫  自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀SHASHIN KAGAKU，PSF-2100。
⑬  全自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀fluidot，F(xiàn)DT-MF80。
⑭  RAYPA自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
 
2、培養(yǎng)基和試劑
①  平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基
②  菌落總數(shù)測(cè)試片
③  無(wú)菌磷酸鹽緩沖液
④  無(wú)菌生理鹽水
 
 
三、檢驗(yàn)程序
1、菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序如下：
 
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、使用RAYPA自動(dòng)培養(yǎng)基制備器，自動(dòng)制備實(shí)驗(yàn)所需的瓊脂培養(yǎng)基。
2、樣品稀釋
固體和半固體樣品：稱(chēng)取 25g樣品置于盛有 225 mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液或無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min~10000 r/min 均質(zhì)1 min~2 min，或放入盛有 225 mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min~2 min，制成 1∶10 的樣品勻液。
液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取 25 mL樣品置于盛有 225 mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液或無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，或放入盛有 225 mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min~2 min，制成1：10的樣品勻液。
 
3、 用1mL量程的Pipetty電動(dòng)移液器吸取 1：10 樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，在振蕩器上振蕩混勻，制成1：100 的樣品勻液。
 
4、 按上述操作，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，需重新?lián)Q1次吸頭。
5、 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇1個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，吸取1 mL樣品勻液于無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)培養(yǎng)皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)作空白對(duì)照。
 
6、 全自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀自動(dòng)將 15 mL~20 mL的46 ℃~50 ℃平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注至培養(yǎng)皿，并自動(dòng)混合均勻培養(yǎng)皿。
 
 
7、水平放置待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 48 h±2 h。水產(chǎn)品 30 ℃±1℃培養(yǎng)72 h±3 h。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面蔓延生長(zhǎng)的菌落，可在凝固后的瓊脂培養(yǎng)基表面覆蓋一薄層平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，進(jìn)行培養(yǎng)。
8、使用自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀，1-3秒自動(dòng)計(jì)數(shù)可疑菌落，并輸出報(bào)告。