一.試驗(yàn)原理

   該技術(shù)由美國應(yīng)用生物公司（ABI）開發(fā)，是基于熒光標(biāo)記單堿基延伸原理的分型技術(shù)，也稱小測序，主要針對中等通量的SNP分型項(xiàng)目。在一個(gè)含有測序酶、四種熒光標(biāo)記ddNTP、緊臨多態(tài)位點(diǎn)5’-端的不同長度延伸引物和PCR產(chǎn)物模板的反應(yīng)體系中，引物延伸一個(gè)堿基即終止，經(jīng)ABI測序儀檢測后，根據(jù)峰的移動(dòng)位置確定該延伸產(chǎn)物對應(yīng)的SNP位點(diǎn)，根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類，從而確定該樣本的基因型。對于PCR產(chǎn)物模板可通過多重PCR反應(yīng)體系來獲得，通常用于10-30個(gè)SNP位點(diǎn)分析。

二.試驗(yàn)流程

• DNA 提取和質(zhì)檢；
• 引物設(shè)計(jì)與合成；
• 擴(kuò)增反應(yīng)；
• 延伸反應(yīng)；
• 測序儀檢測；
• 數(shù)據(jù)分析。

三.優(yōu)點(diǎn)

    1、通量高，一次反應(yīng)可擴(kuò)增最多10-15個(gè)位點(diǎn)；

    2、數(shù)據(jù)完整性高，相對于MassArray高通量分析的時(shí)候經(jīng)常發(fā)生個(gè)別樣本失敗或者個(gè)別位點(diǎn)丟失的情況，MassArra方法丟失的數(shù)據(jù)進(jìn)行補(bǔ)充造價(jià)很高，一般不會(huì)補(bǔ)，而該方法可以以較低成本補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)；

    3、適應(yīng)性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，該方法是ABI公司在10多年前開發(fā)成功的，歷經(jīng)了很多驗(yàn)證，發(fā)表了大量文章。

四.送樣要求：

    1、組織樣本：-20℃或-80℃低溫冰箱中保存，液氮或者干冰運(yùn)輸；市內(nèi)或短途運(yùn)輸可冰袋運(yùn)輸。若提供的材料為新鮮組織、血液細(xì)胞等生物材料，請?zhí)峁┳銐蛱崛?ug以上基因DNA的材料量。

    2、DNA樣本：體積≥50ul，濃度≥50ng/ul，DNA總量≥2ug，純度 OD260/280 在1.7～1.9之間，不含PCR抑制劑，須注明準(zhǔn)確濃度。樣品須低溫冰袋運(yùn)輸。

    3、血液樣本：要求保存于抗凝管中或凍存管中，體積大于2ml，請用干冰運(yùn)送，保證DNA不降解。

    4、樣品為石蠟包埋組織切片的，要求提供10張組織切片光片（面積>10mm×10mm,厚度約5-10um）。

      北京博友順生物技術(shù)有限公司，經(jīng)過幾年的發(fā)展公司更專業(yè)于分子標(biāo)記技術(shù)服務(wù)。公司致力于：基因組SSR引物開發(fā)、AFLP檢測、SSR/STR技術(shù)服務(wù)、ISSR、MSAP、SNP基因分型、條形碼分析、克隆分子實(shí)驗(yàn)。本著“質(zhì)量第一，服務(wù)至上”的原則為各大院校、醫(yī)院、科研院所等單位，提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)，最大程度的滿足用戶的需要。

       公司感謝廣大老師五年來對公司的厚愛和支持，將再接再厲為廣大老師做好科研后勤工作。我們非常慶幸能成長在生物行業(yè)剛剛起航的年代里，能跟隨各位老師前輩們共進(jìn)步、共成功